什么是ELISA(ELISA能检测出什么)

什么是elisa？简述其原理和临床意义

　　酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

　　基本原理

　　它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

　　在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）

　　测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。

　　其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。

　　elisa的临床意义，要根据具体的检测对象来看，主要是检测样本的含量以及定性，仅供参考

免疫中酶联免疫吸附试验的定义用简单明了的语言解释了酶联免疫吸附试验。谢谢

　　ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)即酶联免疫吸附试验他能测抗原或者抗体的含量。最常用的两种方法：双抗体夹心法和间接ELISA双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法：用已知抗体固定于载体上，然后加入待测抗原于之结合，然后加入酶标抗体（用酶标记过的抗体），这个东西与刚才的抗原结合，最后再加入底物，酶催化底物，底物发生呈色反应，颜色反应的强弱与抗原的量相关，从而测定抗原含量。间接ELISA是检测抗体最常用的方法：这个方法是将抗原固定于载体上（注意和前面的方法进行比较），然后加入待测抗体（一抗）与抗原结合，形成抗原抗体复合物，然后加入酶标抗体（二抗），注意这里的酶标抗体与抗体结合，而前一种方法中酶标抗体与抗原结合。最后加入底物，酶催化底物呈色反应，颜色变化的强弱与抗体含量有关，从而测定抗体含量。如果楼主要考试答题的话，ELISA基本原理请参照书上的原文，我的说法是简略的，不是很严谨，只是帮助理解。如果楼主还有什么不明白的，请追问。

酶联免疫吸附法的优缺点

　　ELISA方法：操作简单、快速、敏感性高、特异性强、实验设备要求简单、应用范围广泛、无放射性污染、能定性及半微量、微量、超微量定量分析，是目前应用最广，发展最快的酶免疫学技术方法。

　　竞争法：可测Ag，也可测Ab，特点是：结合于固相的酶标Ag/Ab量与受检Ag/Ab的量是呈反比的。?

　　夹心法：是测Ag最常用的方法，特点是：非竞争结合反应，适用于分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，不能用于小分子半抗原的检测。

　　间接法：是测Ab最常用的方法，特点是：敏感性高、酶标抗抗体具有通用性，即制备一种酶标抗抗体可以用于测定，一个种系内各种抗原的相应抗体。

　　ELISA实验所有方法的缺点很明显：

　　1、重复性不好；

　　2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性；

　　3、不论仪器和手工操作，干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。

酶联免疫吸附试验的原理和实验步骤

　　1.　ELISA的原理

　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

　　操作步骤:

　　1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。

　　2．空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育90分钟e5a48de588b63231313335323631343130323136353331333330336261。

　　3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。

　　4．洗板5次。

　　5．空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育60分钟。

　　6．提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。

　　7．洗板5次。

　　8．空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱，避光孵育30分钟。

　　9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

　　10．洗板5次。

　　11．加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分钟。

　　12．加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。

　　13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。

　　建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。

简述了酶联免疫吸附试验的方法学和临床应用。

　　ELISA基本原理是抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面;测定时，将待测样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原抗体复合物;反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)与待测标本中待检抗体或抗原的量呈一定比例;经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显色，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。

　　临床应用:①双抗体夹心法:用于检测抗原，适用于检测两个或两个以上抗原决定簇的多价抗原;②间接法:用于检测抗体;③竞争法:用于小分子抗原和半抗原的测定，也可以抗体进行测定;④捕获法:用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。

ELISA方法有哪些？各有什么优缺点？

　　ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序，通常是把蛋白、抗体、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗体（capture Ab）固定在固相载体上，再加入一级检测抗体（primarydetection Ab），形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶（enzyme）标记了，即可用来直接测定抗原的量，若无，则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质（substrate），作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系，依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。

　　1.直接法（direct ELISA）

　　将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。

　　优势：操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。

　　缺点：试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。

　　2.间接法（indirect ELISA）

　　此测定方法与直接法类似，差别在于一级抗体没有酶标记，改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

　　优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。

　　缺点：交互反应发生的机率较高。

　　3.双抗体夹心法（sandwich ELISA）

　　被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量；或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取，才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。

　　优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。

　　缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

　　4.竞争法（competitive ELISA）

　　样本里的抗原（自由抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一起竞争相同的抗体，当样品里的自由抗原越多，就可以结合越多的抗体，而固定抗原就只能结合到较少的抗体，反之亦然。经清洗步骤，洗去自由抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较，根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。

　　优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。

　　缺点：整体的敏感性和专一性都较差。

　　5.最新ELISA技术：

　　基于细胞法（cell-based ELISA）：

　　是一种新的定性蛋白检测技术，将细胞直接在微孔板里培养，待检测时，不需抽提蛋白和裂解细胞，便可直接测量微孔板里蛋白经刺激或抑制作用后的变化。

　　优势：无需裂解细胞，所以目标蛋白损失最少，可测定完整细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。

　　缺点：不能测定抗原量。

简述一下用哪种ELISA方法检测乙肝两半？

表面抗原和E抗原采用双抗体夹心法，

表面抗体是双抗原夹心法

E抗体和核心抗体是竞争抑制法或间接法

这五种技术是免疫酶法或酶免疫分析法，而ELISA是酶联免疫吸附法，只是免疫酶法的一种。因此，颗粒捕获酶联免疫分析和免疫组织化学不是酶联免疫吸附分析。

乙肝临床检测常用的ELISA有五种:

1。用双抗体夹心法检测抗原，用特异性抗体包被制备酶偶联物检测相应的抗原，如表面抗原和E抗原。

2。抗体测定采用双抗原夹心法，反应模式与双抗体夹心法相似。用特异性抗原包被，制备酶偶联物，检测相应的抗体，如表面抗体。

3。间接法是检测抗体的常用方法。其原理是利用酶标抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)检测被测抗体结合固体抗原，所以称为间接法，可以检测E抗体和核心抗体。间接法成功的关键在于包被抗原的纯度。由于E抗原和核心抗原结构相似，很难获得高纯度的E抗原或核心抗原，因此临床上使用这种方法检测E抗体和核心抗体的试剂很少。

4。用竞争法检测抗体。当抗原材料中的干扰物质难以去除或难以获得足够纯化的抗原时，可以用这种方法检测特异性抗体。原理是标本中的抗体与一定量的酶标抗体竞争结合固体抗原。例如检测e抗体和核心抗体。

5。捕获包被法用于临床检测中抗体IgM的测定。首先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清样本中的IgM(包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性IgM)。然后加入抗原，只与特异性IgM结合。然后，添加酶来标记针对抗原的特异性抗体。然后与底物一起，颜色与标本中的IgM呈正相关，如检测核心抗体IgM。

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